Анализ кала на наличие хеликобактер

Хеликобактер пилори ─ это бактерия больших размеров, которая локализуется и паразитирует под слизистой оболочкой желудка. В таких условиях она размножается и образует обширные колонии. При избыточной колонизации бактерии заселяют желчные протоки и отделы тонкого кишечника.

Анализ кала на хеликобактер ─ это один из видов диагностики, который подтверждает или опровергает наличие бактерий в организме. Его также проводят для контроля лечения. Тест кала на хеликобактер пилори ─ это неинвазивный (не требующий использования эндоскопии) метод, анализирующий биоматериал.

С диагностикой хеликобактер пилори связано два термина ─ «чувствительность» и «специфичность», на их основании делается заключение анализа.

Чувствительность ─ это способность методики давать положительный результат. Так определяется процент выявления инфекции из общего количества проведенных тестов. Этот параметр посчитать довольно просто.

Специфичность ─ это способность диагностики не давать ложноположительных результатов при отсутствии бактерий. Этот параметр определяет процент отрицательных ответов в группе здоровых людей.

Показания к взятию кала на определение h. pylori

Важно! Язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки ─ абсолютный показатель для диагностики.

В каких случаях назначают делать этот анализ:

1. Заболевания, относящиеся к онкологическим или предопухолевым. Важное значение анализ имеет при лимфоме желудка, так как на ранних стадиях проводят только антибактериальное лечение без применения химиотерапии.
2. Атрофический гастрит.
3. Хронический хеликобактерный гастрит с развитием кишечной метаплазии (замещением желудочного эпителия кишечным).
4. Дисплазия желудка ─ нарушение анатомических и функциональных свойств эпителия органа.
5. Наличие семейного анамнеза рака желудка, особенно при онкологическом заболевании у родственников первой линии (родители — дети), у которых этот диагноз был доказан.
6. Болезнь Менетрие ─ хронический гастрит, для которого характерна значительная гипертрофия слизистой оболочки с последующим образованием кист и аденом. Она является предраковой патологией, поэтому возникает потребность дополнительно исследовать кал на инфекцию хеликобактер пилори.
7. Устойчивая функциональная диспепсия более шести месяцев, особенно при болях в эпигастральной области.
8. Подготовка к длительному применению нестероидных противовоспалительных препаратов, ацетилсалициловой кислоты.
9. У пациентов, которые вынуждены длительно употреблять ингибитор протонной помпы (при болезнях пищевода, для профилактики гастропатии).
10. Заболевания крови ─ тромбоцитопеническая пурпура, идиопатическая железодефицитная анемия.

Методы диагностики

Все методики диагностирования хеликобактер инфекции делятся на прямые и косвенные.

Прямые направлены на выявление самой инфекции или антигенов в кале. Косвенные исследования определяют иммунную реакцию и метаболиты ─ вещества, выделяемые бактериями (уреаза).

Анализ каловых масс относится к прямым методам.

ИФА кала (иммуноферментный анализ)

Это исследование является инновационным и самым востребованным в мировой медицине. Оно определяет h. pylori методом моноклональных антител.

Преимущества ─ низкая стоимость, высокая чувствительность и специфичность более 95%. Недостатки ─ ограниченная доступность в некоторых странах мира.

ИФА h. pylori в стуле более предпочтителен в лабораторной практике, чем ПЦР. Существует большое количество научных данных, на основании которых формируется этот вывод. В анализах высокие показатели чувствительности и специфичности как для первичной диагностики, так и для контроля эрадикации (режим стандартной терапии, направленный на уничтожение хеликобактер). Поэтому анализ на антиген хеликобактер пилори в кале является одним из ведущих, и его игнорировать нельзя.

Иммуноферментный анализ ─ лабораторный метод, определяющий количественное и качественное содержание бактерий в биоматериале. Он основан на специфической реакции антиген — антитело. Для него характерны:

• высокая чувствительность;
• надежность;
• быстрота.

Определение h. pylori происходит за счет того, что бактерии обладают свойствами антигена и способны вызывать в организме синтез антител.

Принцип анализа заключается в специфическом связывании антитела с антигеном. При этом один из элементов соединен с ферментом. В результате реакции с высокоспецифическим реагентом (хромогенным субстратом) образуется окрашенный продукт, количество которого определяют с помощью спектрофотометрии.

Основные стадии ИФА и определение pylori антигена:

1. Процесс идентификации тестируемых бактерий специфическим антителом. Так получают иммунный комплекс.
2. Формирование устойчивой связи бактерий с иммунным комплексом.
3. Преобразование ферментной метки в специальный регистрируемый сигнал.

Всего три стадии сделали возможным автоматизировать анализ кала на антиген хеликобактера. Недостатками такой системы является сложность синтеза ферментных соединений и влияние хеликобактер на активность ферментов.

ИФА кала ─ это основа верификации инфекции h. pylori.

ПЦР (полимеразная цепная реакция)

При этой диагностике проводится работа с ДНК и РНК бактерий. Это метод молекулярной биологии, суть которого заключается в многократном увеличении малых концентраций некоторых фрагментов ДНК.

Для проведения исследования используют несколько компонентов:

• праймеры ─ занимаются поиском и обозначением нужного фрагмента ДНК;
• полимераза ─ фермент, копирующий найденный участок цепи ДНК;
• DNTP ─ строительный материал для создания новой цепи;
• анализируемый образец, выделенный из биоматериала пациента;
• буферный раствор, который создает максимальные условия для реакции.

При проведении реакции специфические фрагменты ДНК накапливаются в геометрической прогрессии. Из одной молекулы получаются более 100 миллионов идентичных молекул.

Таким образом, идентифицируют генетический материал бактерий, который обнаружен даже в самых малых количествах. Если в кале есть фрагменты хеликобактер пилори, то цепочка ДНК выстроится. Если цепь не образовалась, то это значит, что результат будет отрицательным.

Преимущества:

1. Метод автоматизирован, и участие человека в процессе исследования минимальное.
2. Диагностическая ценность метода достаточно высока (до 98%).
3. В условиях современной лаборатории не дает ложноположительных результатов.

Недостатки:

1. Отрицательный результат анализа не исключает наличия возбудителя в организме.
2. Универсальность тест-системы бывает ограничена в связи с разновидностью штаммов бактерий.
3. Результаты исследования биоматериала сложно стандартизировать. Практически невозможно выровнять количество исследуемого материала для сравнения разных образцов между собой.
4. Результаты ПЦР не могут быть окончательными и основополагающими при постановке диагноза.

Бактериологический посев

Анализ на бакпосев h. pylori представляет собой сложный, трудоемкий процесс. Для выращивания живой культуры требуются специальные условия. Как правило, подобные исследования проводят в научно-исследовательских центрах или учебных заведениях, имеющих клиническую лабораторию.

Посев не является 100%-но специфичным методом. Хеликобактер часто невозможно высеять, так как сдать биологический материал правильно не всегда удается. Он может не содержать колонии культивируемого микроорганизма. Также бактерии погибают при нарушении правил сбора материала или его транспортировки.

Поэтому данный метод применять для диагностики нецелесообразно. Его используют для научных экспериментов.

ИХА кала (иммунохроматографический анализ)

Это иммунохимический метод, основанный на распределении исследуемого образца между неподвижной и подвижной фазой и на свойстве антител связываться с антигеном избирательным образом.

Подвижная фаза, содержащая анализируемый материал, перемещается через неподвижную. При этом многократно повторяются акты сорбции (поглощения) и десорбции (выделения). Так происходит идентификация вещества (бактерий).

Преимущества:

• простота и удобство, метод не требует дорогостоящего оборудования;
• достоверность тестов — 99%;
• доступность (более экономичный метод в сравнении с ИФА).

К недостаткам методики можно отнести тот факт, что результат анализа зависит от качества моноклональных антител, которые используют при производстве тест-систем, а также от концентрации бактерий в биоматериале, которые не всегда могут обнаруживаться.

Правила забора материала

Чтобы итоговые показатели анализа были достоверными, нужно знать, как правильно сдавать пробу.

Биоматериал собирают в чистую сухую емкость. В нем не должно содержаться примесей мочи или крови. Оптимальный вариант, если кал собран утром, перед доставкой в лабораторию. Если такой возможности нет, то можно взять и вечернюю пробу. При этом ее нужно хранить не более 10 часов в холодильнике при температуре, не превышающей 8 °C.

Перед тем как сдавать кал, за 72 часа до исследования следует отменить прием лекарственных препаратов. При нарушении перистальтики, наличии запоров пациенту назначается мягкое слабительное (лактулозу) для предупреждения ложного результата.

Для контроля лечения инфекции h. pylori анализ кала проводят не раньше чем через месяц после окончания антибактериальной терапии.